ACQUITY UPLC BEH Amide, 130?, 1.7μm糖基分析專用柱的清洗、再生和儲(chǔ)存

a. 清洗與再生

  如果發(fā)生峰形改變、譜峰分叉、出現(xiàn)肩峰、保留時(shí)間改變、分離度變化、殘留、鬼峰或反壓升高，可能說明色譜柱受到污染。選擇可能溶解可疑污染物的清洗選項(xiàng)。

1. 所有清洗步驟在高溫下更有效。可以在70 °C下進(jìn)行清洗。

2. 使用上述色譜柱常用流速的一半進(jìn)行清洗可能會(huì)很有用。在這種情況下出現(xiàn)高壓的可能性就降低了。

3. 首先采用同時(shí)也是最簡(jiǎn)單的清洗步驟是在0–100%水范圍內(nèi)運(yùn)行一系列梯度。確保降低水相比例高于75%的梯度的流速。在清洗過程中，柱長(zhǎng)為150 mm的色譜柱應(yīng)在250 μL/min或更低的流速下操作。梯度可短至5倍柱體積，并且3–5次重復(fù)即可達(dá)到效果。

4. 再生步驟和使用100%水性流動(dòng)相進(jìn)行沖洗的步驟有助于保持最佳峰形和獲得最高的HILIC分離選擇性。此外，分析人員可使用含有0.1% TFA的流動(dòng)相執(zhí)行梯度，以保持或恢復(fù)BEH Amide糖蛋白分析專用柱的性能。一些離子態(tài)污染物可能會(huì)強(qiáng)烈吸附到HILIC固定相上，TFA能夠中和這類污染物以及與其形成離子對(duì)，從而有效清洗色譜柱固定相。

5. 用戶可進(jìn)樣多種不同的清洗溶液以除去色譜柱中的強(qiáng)吸附物質(zhì)或顆粒物質(zhì)。通過系統(tǒng)配置實(shí)現(xiàn)最大體積進(jìn)樣。使用這類強(qiáng)清洗溶液時(shí)，最好斷開檢測(cè)器與色譜柱的連接并直接使其流向廢液盤。

6. 通常建議將流向變換或反沖作為清洗步驟的一部分。此項(xiàng)應(yīng)保留為最后的解決辦法。此方法有可能進(jìn)一步損壞色譜柱或提供瞬時(shí)性能改善。

b. 儲(chǔ)存

  如果需要將色譜柱在室溫下放置超過四天，應(yīng)將其保存于100%乙腈中。色譜柱在高溫和/或極端pH下使用后，應(yīng)立即保存于100%乙腈中，盡可能延長(zhǎng)色譜柱使用壽命。切勿將色譜柱保存在高水相(<50%有機(jī)相)流動(dòng)相中，因?yàn)檫@樣會(huì)滋生細(xì)菌。如果流動(dòng)相中含有緩沖鹽，則先用10倍柱體積(有關(guān)常規(guī)色譜柱體積，請(qǐng)參見表1)的HPLC級(jí)水沖洗色譜柱，再用100%乙腈沖洗并儲(chǔ)存。如果未執(zhí)行這一中間步驟，在引入100%乙腈時(shí)色譜柱或系統(tǒng)中可能會(huì)出現(xiàn)緩沖鹽沉淀。將色譜柱完全密封，防止溶劑蒸發(fā)而導(dǎo)致柱床變干。

  注：如果色譜柱運(yùn)行了含甲酸鹽(如，甲酸銨、甲酸等)的流動(dòng)相，并且之后使用100%乙腈進(jìn)行沖洗，那么在重新安裝色譜柱并再次運(yùn)行含甲酸鹽的流動(dòng)相時(shí)，可能需要花費(fèi)略長(zhǎng)的柱平衡時(shí)間。